雜志名稱：Cornea

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文獻題目：Ebihara N, Matsuda A, Nakamura S, et al. Role of the IL-6classic-and trans-signaling pathways in corneal sterile inflammation and woundhealing[J]. Investigative ophthalmology & visual science, 2011, 52(12):8549-8557.

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第一作者：Nobuyuki Ebihara

作者單位：From the Departments of Ophthalmology and Immunology, and the Divisionof Biomedical Imaging Research, Juntendo University School of Medicine, Tokyo,Japan.

本實驗所用產品：AAH-INF-3(40個炎癥相關蛋白)

實驗樣品：細胞培養上清

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研究背景：

??當細胞在體內死亡時，會發生強烈的炎癥反應，包括嗜中性粒細胞（其次是單核細胞）迅速遷移到損傷的組織中。然而，激活細胞損傷引起的炎癥反應機制尚未完全了解。有證據表明，壞死性細胞釋放各種內生的“危險”分子，如HMGB1，IL-1，IL-33，HSP60，尿酸，S100蛋白，DNA ，三磷酸腺苷和防衛素等，在這些危險信號中，已經研究了IL-1在角膜的無菌炎癥中的作用，IL-1 由完整的角膜上皮細胞表達，并在機械損傷后釋放到角膜基質中。然而無菌角膜炎癥和傷口愈合與細胞死亡相關的機制尚未得到充分的研究。從壞死角膜上皮細胞釋放的內源性危險分子不僅對炎性細胞具有趨化作用，而且上調角膜成纖維細胞趨化因子的產生。本研究旨在角膜無菌性炎癥和傷口愈合的機制。

1?分組

無血清培養對照組

壞死角膜上皮細胞培養上清刺激組

壞死角膜上皮細胞培養上清+IL1R拮抗劑刺激組

2?結果

2.1?角膜成纖維細胞趨化因子和細胞因子的生成是由壞死性角膜上皮細胞上清液刺激所產生

用Raybiotech AAH-INF-3抗體芯片檢測三個組的細胞上清，結果為用無血清培養基培養的角膜成纖維細胞組成型產生IL-8，MCP-1，RANTES和TIMP-2（圖a）。此外，當角膜成纖維細胞與含有壞死性角膜上皮的上清液的無血清培養基一起培養時，誘導產生IL-6，MCP-2和SIL-6R，并且IL-8，MCP-1和RANTES的產生增強(圖b)。在這些分子中，IL-6被壞死角膜上皮細胞的上清液誘導最強烈（圖2）。接下來，研究壞死性角膜上皮細胞上清液中哪個因子通過角膜成纖維細胞誘導IL-6，MCP-2和SIL-6R的產生。用IL-1R拮抗劑的治療幾乎完全抑制了這些分子的產生，表明衍生自壞死角膜上皮細胞的IL-1通過角膜成纖維細胞誘導IL-6，MCP-2和SIL-6R的產生。另一方面，IL-1R拮抗劑通過用壞死角膜上皮細胞的上清液培養的角膜成纖維細胞部分抑制IL-8，MCP-1和RANTES的產生，表明其他危險分子也增強了這些趨化因子的產生（圖c，2）。

2.2 ?IL-1對角膜成纖維細胞IL-6產生的影響

從用IL-1處理的細胞的培養物上清液獲得的芯片結果（30ng / mL，24小時）與來自未處理細胞上清液的芯片結果進行比較，顯示用IL-1刺激成纖維細胞誘導產生IL-6，MCP-2和SIL-6R。其中在這些分子中，IL-6在IL-1誘導下表達最強烈。

2.3?IL-6R和gp130由角膜成纖維細胞表達

RT-PCR顯示角膜成纖維細胞有mIL-6R和DS-SIL-6R的mRNA表達。然而，當通過流式細胞術檢測mIL-6R和gp130蛋白在角膜成纖維細胞上的細胞表面表達時，未檢測到mIL-6R的表達，但檢測到gp130。該結果表明，角膜成纖維細胞顯示出很少或沒有mIL-6R的細胞表面表達。

2.4?IL-6R和gp130通過角膜上皮細胞表達

通過RT-PCR，顯示角膜上皮細胞有mIL-6R和DS-SIL-6R的mRNA表達。通過流式細胞術檢測角膜上皮細胞上mIL-6R和gp130蛋白的細胞表面表達，角膜上皮細胞&l